PERCOBAAN VI UREASE

VI.1 PENDAHULUAN

            Penentuan kadar urea (ureum) di dalam urine atau cairan lainnya, dapat dilakukan secara enzimatik dengan urease di dalam alat Conway. Urea (ureum) akan diubah menjadi ammonium karbonat. Dari ikatan ini dapat dibebaskan amonianya, dengan penambahan alkali. Ammonia yang bebas akan berdifusi ke cawan-cawan yang berisi larutan asam borat, sehingga terikat menjadi ammonium tetraborat. Kemudian campuran ini dititrasi dengan asam sulfat atau asam klorida dengan indicator Tashiro, sehingga akhirnya dapat ditentukan kadar ureanya (ureumnya).

VI.2 PERCOBAAN

Alat:

1.      Mikroburet (ujungnya disambung dengan pipa gelas yang mempunyai pipa kapiler)

2.      Alat Conway

3.      Batang pengaduk

Bahan:

1.      Ekstrak urease

45 gram kedele yang telah bersih direndam dalam air di lemari es semalam, tambahkan 75 mL air dan 225 mL gliserin, diblender selama 4 menit. Kemudian saring dengan kain dan cairan disaring melalui kertas saring lipat di lemari es. Filtrate disimpan di lemari es.

2.      Urine

Yang akan dipakai diencerkan 5 – 10 kali

3.      Buffer fosfat

3 gram Na₂HPO₄ dan 2 gram KH₂PO₄ dilarutkan dalam 100 mL aquades yang mengandung 0,03 M EDTA (di-Na).

4.      Indicator Tashiro

200 mL 0,1% larutan alcohol metil-merah ditambah 50 mL 1% larutan alcohol metilen-biru.

5.      Larutan K₂CO₃ jenuh

110 gram kalium karbonat dalam 100 mL air.

6.      Larutan asam borat 2%

7.      Gliserin teknis

Gliserin diberi setetes larutan fenolftalein dan beberapa tetes larutan NaOH sampai larutan menjadi merah.

8.      HCl 0,005 N

9.      H₂SO₄ 0,005 N

Prosedur:

1.      Bagian-bagian yang nantinya akan merapat diulasi dengan gliserin-NaOH yang mengandung fenolftalein, supaya alat Conway dapat ditutup dengan rapat. Untuk satu penentuan diperlukan 4 alat Conway.

2.      Cawan titrasi A diisi dengan 1 mL larutan 2% asam borat dan 1 tetes indicator Tashiro.

3.      Dalam keadaan miring (diganjel) dengan dinding pemisahnya di sebelah bawah, ditaruh 1 mL larutan K₂CO₃ jenuh di salah satu sisi (1) dinding pemisah (B). Di sisi lainnya (2) ditaruh:

Alat Conway           I             : 0,2 mL urine

                             II            : 0,02 mL aquades

III          : 0,2 mL urine +0,5 mL larutan urease dalam buffer fosfat yang mengandung 0,03 M EDTA (di-Na).

IV          : 0,2 mL aquades + 0,5 mL larutan urease dalam buffer fosfat yang mengandung 0,03 M EDTA (di-Na).

4.      Sesudah diisi, alat-alat Conway tersebut langsung ditutup dan diklem.

5.      Alat I dan II dapat langsung dikerjakan dengan mencampurkan kedua cairan yang terdapat di kedua bagian. Ini bisa dilakukan dengan mengalirkan cairan dari satu ke lain bagian dengan memberi kedudukan condong memutar.

6.      Conway-unit diletakkan mendatar selama 2 jam pada suhu kamar atau 1 jam pada suhu 37°C, sambil sekali-kali memutarnya.

7.      Setelah 15 menit dari waktu pengisian urease, alat III dan IV dapat dikerjakan sama seperti I dan II.

8.      Sekarang semua cawan titrasi dititrasi dengan H₂SO₄ atau HCl dengan normalitas 0,005 N sampai timbul warna violet muda yang tetap dengan memakai mikro-buret.

Perhitungan

Selisih hasil titrasi antara I dan II akan menunjukkan amoniak yang ada dalam urine.

Selisih antara III dan IV akan menunjukkan jumlah amoniak setelah kerja urease.

Selisih antara kedua harga tersebut akan menunjukkan banyaknya amoniak yang berasal dari urea (ureum).

Catatan

1.      Alat Conway harus bersih benar-benar.

2.      Larutan urease dibuat segar dengan mencampurkan 1 mL ekstrak urease dan 1 mL buffer fosfat dan diencerkan dengan aquades sampai 5 mL.

Tugas

Tentukan kadar urea (ureum) di dalam urine dengan menggunakan Alat Conway!

VI.3 TUGAS PENDAHULUAN

1.      Apa yang dimaksud dengan:

a.     Urea

b.    Urease

c.     Urine

2.      Dari zat-zat metabolit apa urea (ureum) terbentuk? Tuliskan reaksi kimianya!

3.      Jelaskan metode lain yang dapat digunakan untuk menentukan ureum secara kuantitatif!

Posted in: Biokimia II